Este kit provee un método  para la extracción de ADN genómico de alta calidad a partir de sangre total o médula ósea de mamífero.

Este kit está basado en un proceso simple y rápido de lisis y desproteinización sin utilizar reactivos tóxicos, disolventes orgánicos o tratamientos enzimáticos.

El ADN obtenido tiene una elevada pureza y puede ser utilizado en procedimientos como Southern Blot, PCR, análisis de RFLP,análisis de restricción, secuenciación y clonaje.

Características:

• Método rápido, NO TOXICO y económico.
• Método completamente escalable permitiendo procesar un amplio rango de muestras desde 100 µl hasta 10 ml.
• Rendimiento de 35 µg/ml con excelente calidad del ADN, A_260/280  1.7- 1.9.
• Completado en 45-60 minutos.

Aplicaciones:

• Banco de ADN.
• PCR y PCR cuantitativa.
• Análisis de SNP .
• Southern Blotting.
• Secuenciación y NGS.

Procedimiento:

Este kit está designado para una rápida purificación de ADN genómico puro a parir de sangre total, suero, plasma, fluidos corporales y “spots” de sangre seca utilizando Microspin columnas con membrana de sílica a la cual se une selectivamente el ADN.

El kit utiliza un nuevo formulado Tampón de lisis/unión específico para la extracción de ADN a partir de muestras de sangre.

Características:

• Tecnología de membrana de sílica con Microcolumnas .
• Para una rápida purificación de ADN de elevada calidad a partir de sangre.
• Tamaño de muestras: 300 µl de sangre, suero, plasma, fluidos corporales y “spots· de sangre seca.
• Completa eliminación de contaminantes e inhibidores para las aplicaciones posteriores.
• Volumen de elución: 50-200 µl.
• Rendimiento típico: 6- 9 µg ADN
• El ADN obtenido puede ser utilizado directamente en PCR, Southern, reacciones enzimáticas, clonaje, etc.

Aplicaciones:

• ADN genómico, bacteriano y vírico.
• ADN a partir de sangre total (humana o animal, fresca o congelada).
• ADN a partir de sangre tratada con citrato, EDTA, heparina.
• ADN a partir de suero, plasma, fluidos corporales y “spots· de sangre seca.

Procedimiento:

La lisis se consigue por incubación de la sangre total en un tampón que contiene elevadas cantidades de iones caotrópicos en  presencia de proteinasa K a 70ºC. Añadiendo etanol se generan las condiciones apropiadas para la unión del ADN a la membrana de sílica. Los conatminantes son eliminados mediante lavados con diferentes tampones. El ADN es finalmente eluído con un tampón indicado para ello.

Este kit está designado para una eficiente y rápida extracción de ADN genómico de alta calidad a partir de una amplia variedad de muestras incluyendo: Cultivo de células, tejidos animales, cola de ratón, tejidos embebidos en parafina, bacterias Gram (-), (+), levaduras, Drosophila melanogaster, fluidos corporales (saliva, semen, plasma, orina, suero, etc…), pelos, «Blood stain»).

Características:

• Método rápido y económico.
• Método escalable ya que no utiliza columnas o membranas con protocolos adaptados para una mayor flexibilidad.
• Método seguro ya que elimina la necesidad completamente de utilizar reactivos tóxicos.
• Permite procesar diferentes muestras biológicas.
• Se obtiene un ADN de alta calidad con un A260/ 280 de 1.7- 1.9.

Aplicaciones:

• Banco de ADN.
• PCR y PCR cuantitativa.
• Análisis de SNP .
• Southern Blotting.
• Secuenciación y NGS.

Procedimiento:

El procedimiento incluye una lisis celular con un detergente aniónico que solubiliza los componentes celulares necesarios, el ARN contaminante puede ser eliminado con un tratamiento con RNasa. Las proteínas celulares son eliminadas mediante precipitación, lo que permite dejar el ADN genómico en solución. Finalmente, el ADN genómico es aislado por una precipitación con isopropanol.

Este kit está designado para una eficiente y rápida extracción de ADN genómico de alta calidad a partir

de una amplia variedad de muestras incluyendo sangre,células en cultivo, tejidos animales, colas de ratón, bacterias, levaduras,  muestras clínicas (suero, plasma, heces, orina ) y muestras  de forense, tejidos embebidos en parafina utilizando para ello MicroSpin columnas con membranas de fibra de vidrio que unen selectivamente el ADN.

Características:

• Tecnología de MicroSpin columnas con membranas de fibra de vidrio.
• Hasta 35 µg de ADN se pueden obtener.
• Tamaño de la muestra: 200-300 µl sangre total, 200 µl “buffy coat”; 25-50 mg de tejido; 10⁴– 10⁷ células; 0.2-0.5 cm cola de ratón (25-50 mg); 10⁸ levaduras; 10⁹ bacterias (Gram+ o Gram -); secciones de tejidos embebidos en parafina. Para el resto de muestras o aplicaciones especiales consultar con nuestro servicio técnico.
• El ADN obtenido es de elevada calidad y puede ser utilizado directamente en PCR, Southern, cualquier reacción enzimática, clonaje, etc.

Procedimiento:

El procedimiento incluye  una lisis en  proteinasa K y una solución caotrópica  que a su vez  creará las condiciones necesarias para que el ADN se una a la membrana  de fibra de vidrio. Los contaminantes son eliminados por lavados con eficientes tampones de lavado y finalmente el ADN es eluído con un tampón de elución.

Este kit está designado para una eficiente extracción de ADN genómico y mitocondrial a partir de pequeñas muestras, tales como diferentes tejidos  y células animales, muestras microdiseccionadas por laser, pequeñas cantidades de sangre utilizando una columnas con un diseño especial

Estas columnas especiales permiten volúmenes de elución tan pequeños como 10 microlitros.

Características:

• Tecnología de membrana de sílica con Microcolumnas  con un diseño especial.
• Rápida purificación de ADN de elevada calidad a partir de muestras de pequeño tamaño.
• Completa eliminación de contaminantes e inhibidores para las aplicaciones posteriores.
• Volumen de elución: 10-30 µl.
• El ADN obtenido puede ser utilizado directamente en PCR, Southern, reacciones enzimáticas, clonaje, etc.

Aplicaciones:

• ADN extraído a partir de tejidos (Tejidos humanos o de ratón, microdisecciones por laser).
• ADN extraído a partir de células (cultivos de células). 
• ADN extraído a partir de muestras clínicas (muestras de sangre, biopsias ).
• ADN extraídas a partir de muestras forenses (spots de sangre, frotis bucales).

Este kit provee un método para una eficiente y rápida  extracción de ADN genómico a partir de tejidos y células de plantas y hongos.

Es conocido que las plantas contienen cantidades de diferentes sustancias (polisacáridos, polifenoles, etc) y que plantas del mismo género o géneros relacionados pueden presentar enormes variabilidades en sus composiciones bioquímicas, de esta forma, se hace difícil de disponer de un único método de extracción de ADN para todas las plantas.

Para solventar este problema y poder abarcar el mayor número de plantas posibles se utiliza una solución de PVP   que es capaz de unir los polisacáridos y polifenoles que se liberan mediante la lisis celular y que poseen la capacidad de formar complejos con los ácidos nucleicos y degradarlos o hacer que preciten con ellos.

Caracteríticas:

• Método rápido, sencillo y económico.
• Método completamente escalable permitiendo procesar un amplio rango de muestras.
• Método seguro, ya que elimina completamente la necesidad de utilizar reactivos tóxicos.
• Contiene una solución de PVP que permite trabajar con aquellas plantas con un elevado contenido de polisacáridos o compuestos fenólicos.
• Se completa en unos 45-60 minutos.
• Se obtiene un ADN que permite ser utilizado para PCR, Southern blot, RFLP, secuenciación o clonaje.

Aplicaciones:

• Banco de ADN.
• PCR y PCR cuantitativa.
• Análisis de SNP .
• Southern Blotting.
• Secuenciación y NGS.

Procedimiento:

El procedimiento incluye una homogenización de la muestra en un Tampón de extracción y la Solución de PVP. La lisis se completa con la incubación en un Tampón de Lisis y  RNasa a 37ºC durante 30 minutos.

Las proteínas celulares y restos celulares son eliminados mediante una Tampón de eliminación de proteínas, lo que permite dejar el ADN genómico en solución. Finalmente el ADN genómico es aislado por una precipitación con isopropanol.

Este kit proporciona un método eficiente y rápido para la extracción de ADN genómico de plantas y hongos utilizando MiniSpin columnas.

El kit incluye 2 optimizados tampones de lisis, basados en los métodos establecidos de CTAB y de SDS. Las plantas son muy heterogéneas y contienen diferentes metabolitos como polifenoles, polisacáridos o componentes ácidos,  DANAGENE SPIN PLANT  DNA Kit suministra 2 diferentes procedimientos de lisis para el óptimo procesamiento de diferentes muestras de plantas.

Además, también le suministramos una solución de PVP que une los polisacáridos y polifenoles.

Características:

• Tecnología de membrana de sílica que utiliza MiniSpin columnas.

• Se puede utilizar 2 tampones de lisis optimizados y la solución de PVP.

• Elevada pureza: A₂₆₀/A₂₈₀ =1.6 – 1.9.

Aplicaciones:

• Extracción de ADN genómico de plantas a partir: Tejido  de plantas o  de hongos  fresco, congelado o liofilizado. Células de plantas.

• El ADN aislado está listo para las siguientes aplicaciones como PCR, PCR cuantitativa y genotipado.

Procedimiento:

Las muestras de plantas son primero rotas/homogenizadas y luego lisadas en un optimizado tampón que contiene sales caotrópicas, agentes desnaturalizantes y detergentes.

Se puede utilizar 2 optimizados tampones de lisis basados en los métodos establecidos de CTAB y SDS.

El lisado crudo es limpiado por centrifugación y el lisado limpio es mezclado después con el tampón de unión y procesado a través de una MiniSpin columna que contiene una membrana de sílica que permite la unión del ADN.

Los contaminantes e impurezas como sales, metabolitos y componentes celulares son eliminados son eliminados con un paso de lavado con 2 diferentes tampones de lavado.

ADN genómico de elevada pureza es luego eluido en un Tampón de elución. El ADN ya está listo para ser utilizado en diferentes aplicaciones.

Este kit está designado para una rápida y eficiente purificación de ADN genómico a partir de diferentes muestras de saliva incluyendo:

1. Muestras de saliva.
2. Muestras de células bucales con cepillos de espuma DANASALIVA  Hisopos. Ref.0603.42
3. Muestras de saliva conservadas con nuestro DANASALIVA  Sample Collection Kit.  Ref.0603.43
4. Muestras de saliva conservadas con los kits de ORAGENE (DNA Genotek).

Características:

• El  ADN a partir de saliva es equivalente al de sangre  para aplicaciones posteriores.
• Método no-invasivo e indoloro mejorando el cuidado del paciente.
• Método económico, rápido y reproducible.
• Método seguro y elimina la necesidad de utilizar  reactivos tóxicos.

Aplicaciones:

• Banco de ADN.
• PCR y PCR cuantitativa.
• Análisis de SNP .
• Southern Blotting.
• Secuenciación y NGS.

Procedimiento:

El procedimiento incluye una lisis celular con un detergente aniónico que solubiliza los componentes celulares necesarios, y proteinasa K y RNAsa. Las proteínas celulares son eliminadas mediante precipitación, lo que permite dejar el ADN genómico en solución. Finalmente, el ADN genómico es aislado por una precipitación con isopropanol.

*Validación del DANAGENE SALIVA DNA KIT en el ROCHE 454 TITANIUM Next-Generation Sequencing Platform fue realizada en el Centro de Investigación, Tecnología e Innovación (CITIUS) Universidad de Sevilla.

Cuantificación. Utilizando el Quant-iT Picogreen dsDNA Reagent from INVIROGEN.

Ensayo de la calidad de la librería. Correr una alicuota de 1 ml  de la Librería de  ADN en un Agilent Bioanalyzer High Sesitivity DNA chip.

Cuantificación de la librería por PCR quantitativa.  KAPA Library Quantification Kit from Kapabiosystems.

El AND aislado con el  DANAGENE SALIVA DNA KIT a partir de diferentes muestras de saliva tiene una excelente calidd para ser utilizado en NGS:

• AND de doble cadena
• DO260/280> 1.75
• Concentración > 10 ng/μl.
• Calidad Librería: fragmentos entre 1400 y 1800 pb.
• Cuantificación Librería: > 1 x 10⁷ moléculas/μl.

Estos sistemas proporcionan un rápido y seguro todo en uno procedimiento para la recolección, estabilización y transporte de muestras de saliva a temperatura ambiente.

Características:

• Fácil recolección, transporte y procesamiento.
• Método No-invasivo e indoloro.
• Conserva la saliva durante 2 años a temperatura ambiente.
• La saliva es conservada y lista para ser enviada.
• Permite la posterior extracción de un ADN de excelente calidad e integridad.

DANAGEN-BIOTED ha desarrollado 2 sistemas específicos para este propósito:

1. DANASALIVA  Sample Collection Kit.  Ref.0603.43

Las muestras de saliva son recogidas  escupiendo en el interior del embudo (1), el cual se ha ensamblado con el Tubo de Recolección (2). Después, de recoger 2 ml de saliva el contenido de la Solución Conservación Saliva (3) es añadido y mezclado con la saliva recogida.

El Tubo de Recolección (2) es enviado al laboratorio para la extracción y análisis del ADN con el DNAGENE SALIVA DNA KIT.

2. DANASALIVA Hisopos. Ref.0603.42

Hisopos de espuma individuales que permiten una recolección segura de células bucales.

De esta forma muestras de células bucales pueden ser obtenidas por personal no entrenado y se hace más fácil la colaboración de familiares en estudios genéticos. Los investigadores o donantes simplemente deslizan el hisopo por las mejillas con movimientos durante 30 segundos para recoger el mayor número de células bucales.

Después de la recolección, el hisopo es introducido en el container cilíndrico para un transporte seguro de la muestra al laboratorio para la extracción y análisis del ADN con el DNAGENE SALIVA DNA KIT.

El AND extraído está disponible para ser utilizado en PCR.